組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
VB5Fmoc-Gly-Wang resin 100-200 mesh, Substitution 0.3-0.8mmol/g穿心蓮內(nèi)酯  98%

VB6L-谷氨酰胺叔丁酯鹽酸鹽 98%熊果苷 99%

VB12L-谷氨酸-5-環(huán)己酯  98%扁桃苷 97%

PLPL-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽 97%扁桃苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>98%

Pyridoxal hydrochlorideL-谷氨酸5乙脂 ≥98.5%胺  分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%（HPLC)

Pyridoxamine 2HCLL-谷氨酸-5-甲酯 98%氫酸胺  98%

Isitol niacinateL-谷氨酸-5-叔丁酯鹽酸鹽 98%牛蒡子苷元 ≥98% (HPLC)

VK4L-谷氨酸二叔丁酯鹽酸鹽 97%牛蒡子苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>98%

VBT(R)-2-氨基-5-叔-丁氧基-5-羰基戊酸  ≥98.5%青蒿素 分析標(biāo)準(zhǔn)品

(±)-Carnitine hydrochlorideBOC-谷氨酰胺-OL   98%積雪草酸  98%

INAHL-谷氨酸-α-芐酯 98% 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥97%

VPL-谷氨酸雙芐酯對甲苯磺酸鹽 98%土木香內(nèi)酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥97%(HPLC)

Orotic acidL-谷氨酸對硝基酰苯胺 98%異補(bǔ)骨脂素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>98%

D-Sodium isoascorbiate甘肽 ≥97% (HPLC)蘆薈寧 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%

AstaxanthinGalanin rat ≥97% (HPLC)脫羊藿素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%(HPLC)

Dehydroascorbic acid神經(jīng)節(jié)肽(抗原) ≥97% (HPLC)硫辛酸 98%

鄰硝基氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)tch1 (5B5) Rat mAbMMP-15  基質(zhì)金屬蛋白酶-15抗體

間氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)TDP43 (G400) AntibodyMMP-14  基質(zhì)金屬蛋白酶-14抗體

2,5-二甲酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)p70 S6 Kinase MCF7 Control Cell ExtractsMMP-13  基質(zhì)金屬蛋白酶13抗體

一氯二溴標(biāo)準(zhǔn)溶液(387±18μg/ml,溶劑:甲)TDP43 (A260) AntibodyMMP-12  基質(zhì)金屬蛋白酶-12抗體

乙標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.807mg/mL,基體:)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAbMMP-11  基質(zhì)金屬蛋白酶-11抗體

間硝基氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)PSD95 (D27E11) XP® Rabbit mAbMMP-10  基質(zhì)金屬蛋白酶-10抗體

1,2,3,4-四氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)MLANA/MART-1 AntibodyMMP-1  基質(zhì)金屬蛋白酶-1抗體

1,2,4-三氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:甲)Phospho-μ-Opioid Receptor (Ser375) AntibodyMMP-1  基質(zhì)金屬蛋白酶-1抗體

叔戊(Standard for GC,≥99.5%(GC))Rabbit IgG Isotype Control (Alexa Fluor® 647 Conjugate)MMP-1  基質(zhì)金屬蛋白酶-1抗體

2-乙酰吡啶(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-Doublecortin (Ser334) AntibodyMMAA/cblA  甲基二酸尿癥cblA抗體
苛養(yǎng)木桿菌PCR檢測試劑盒廠家G蛋白偶聯(lián)受體γ12抗體Dehydroherbarin中文名：別名：分子式：C16H14O5

G蛋白偶聯(lián)受體γ14抗體Herbarin中文名：別名：分子式：C16H16O6

己糖6磷酸脫氫酶抗體Colelomycerone A中文名：別名：分子式：C17H18O6

生發(fā)中心B淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白2抗體Herbaridine B中文名：別名：分子式：C17H20O6

G蛋白偶聯(lián)受體172B抗體Shiraiachrome A中文名：別名：分子式：C30H26O10