注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
2,2′-O-Cyclouridine叔丁基亞磺酰氯 97%順-6-壬烯  95%

2′-BrdU二甲基烯酸四乙二酯 包含~0.006% 對苯二酚 穩(wěn)定劑, 90%順-6-壬烯  95%,FG

2′-O-Methyl-Uridine硫鏈絲菌肽 90%丁位壬內(nèi)酯  98%

2′-Azido-2′-deoxyuridine三苯基硅乙炔 98%乙酸橙花酯  95%

2-FDU四(THF) 無級,≥99.9%, 無穩(wěn)定劑正辛 AR,99.0%

2-FDC三乙烯四胺 Standard for GC1-辛 99%

Ara-A原甲酸*酯 99.8%，無級1-辛 97%

Ara-C鹽酸硫胺 分析標(biāo)準(zhǔn)品羅勒烯  90%

Uracil 1-β-D-arabifuraside2,3,5-三酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品桂酸苯乙酯 96%

1-β-D-Arabifurasylthymine1,1,1-三(羥甲基)乙烷 97%3-苯 99%

Trifluorothymidine三氟磺酰氯 99%3-苯 ≥98%, FCC

Cyclo-C十三 97%3-苯酸 GR，99%

RNA四丁基氫氧化銨 ~40% 溶液，離子色譜級3-苯 95%

t-RNA2,4,5-三氯苯酚 分析標(biāo)準(zhǔn)品3-苯 ≥95%,  FCC

RNA-Na甲基叔戊基 97%異丁酸苯氧基乙酯 98%

DNADL-α-酚琥珀酸酯 分析標(biāo)準(zhǔn)品異丁酸苯氧基乙酯 ≥98%, FCC

子囊霉素Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)S100A6  S100鈣結(jié)合蛋白A6抗體

子囊霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (APC Conjugate)S100A4  S100A4抗體

阿扎那韋XPD (D3Z6I) Rabbit mAbS100A14  S100A14/15抗體

阿扎那韋（標(biāo)準(zhǔn)品）Human IL-4 Neutralizing (D20H1) Rabbit mAbS100A13  S100A13抗體

鹽酸托莫西汀LIN28B (D4H1) Rabbit mAbS100A11  S100鈣結(jié)合蛋白A11抗體

鹽酸托莫西汀(標(biāo)準(zhǔn)品)BRM (D9E8B) XP® Rabbit mAbS100A10  S100鈣結(jié)合蛋白A10抗體

阿托伐醌,阿托喹酮BRM (D9E8B) XP® Rabbit mAbS-100/S100A1  S100A1抗體

阿托伐醌,阿托喹酮（標(biāo)準(zhǔn)品）COX IV (4D11-B3-E8) Mouse mAbS100 alpha 2  S100A2抗體

阿西替尼SignalSilence® ADAM9 siRNA IRYBP/APAP1/CD337  凋亡相關(guān)蛋白1抗體

阿扎哌隆Mouse TNF-α Neutralizing (D2H4) Rabbit mAbRyadine Receptor  心肌蘭尼堿受體抗體（腦肌蘭尼堿受體）
幼蟲芽孢桿菌PCR檢測試劑盒規(guī)格人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25毫升

人抗紡錘體抗體(MSA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人抗風(fēng)疹病毒IgG抗體(anti-RVIgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人抗風(fēng)疹病毒IgM抗體(anti-RVIgM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃10毫克

人抗副流感病毒IgG抗體(anti-PIVIgG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5片

人抗副流感病毒IgM抗體(anti-PIVIgM)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：10個(gè)

人抗鈣蛋白酶抑素抗體(ACAST-DⅣ)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量：5000u
檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。